ce-sds分离原理

ce-sds分离原理

ce-sds非还原法分离原理

毛细管电泳是以高压直流电场为驱动力,以毛细管为分离通道。毛細管內先填充凝胶,此时凝胶会在毛細管內形成分子筛,样品依分子量的大小在毛細管內移动速度不同而进行分离,能够有效减小组分扩散,所得峰型尖锐,分离效率高。 CE-SDS(非还原) 仪器组成 毛细管电泳系统的基本结构包括进样、填灌/清洗、电流回路、毛细管/温度控制、检测/记录/数据处理等部分。 CE-SDS(非还原) 检测器 CE-SDS(非还原) 进样方式 1. 流体力学进样方式 (1)进样端加压 (2)出口端抽真空 (3)虹吸进样 进样量:毛细管长度的1%-2%nL级、非常小 2. 电动进样方式 毛细管一端插入样品瓶,加电压。 3. 扩散进样 试样通过扩散作用进入分离柱端口处。 CE-SDS(非还原) 工作电压的确定 1、在电泳条件下,改变电压(或电流)测定对应的电流(或电压) 2、做电压~电流曲线 3、取线性关系中的最大电压(或电流),作为分离电压(或电流)。线性以上的电压,焦耳热效应过大,一般不宜选用。但如果分离效率很高,就可以选用,以便加快分离速度。在做CGE时,电场强度应控制在150~400V/cm之间,否则容易导致凝胶的破坏。 电泳温度的选择 电泳温度的选择,主要是指毛细管外表温度的选择与控制。温度变化不仅影响分离的重现性,而且影响分离效率。温度选择应考虑:热效应控制、重现性控制、分离效率控制盒分离介质对温度的限制等因素。多数情况下,在20~30℃之间进行电泳,就能获得良好的分离结果。 各试剂的作用 SDS-MW Sample Buffer: 由于蛋白是两性的,与SDS结合会使蛋白带负电荷,使其在毛细管中往正极方向移动。